自2022年猴痘病毒(MPXV)爆发以来，全球116个国家和地区向世界卫生组织(WHO)报告了超过90,000例病例，猴痘已被列为“国际关注的突发公共卫生事件”。

猴痘是一种病毒性人畜共患病，症状包括发热、头痛、肌肉酸痛、背痛、淋巴结肿大和皮疹。尽管大多数患者在几周内恢复，但部分患者可能会严重恶化甚至死亡。目前的检测方法主要是实验室检测，如实时定量聚合酶链反应(qPCR)，但这些方法需要昂贵的设备和专业技术人员，在资源有限的地区难以普及。

因此，开发一种高效、便捷和快速的检测方法变得尤为重要。

近日，王升启等团队在《Nature Communications》发表论文：“Ultrasensitive single-step CRISPR detection of monkeypox virus in minutes with a vest-pocket diagnostic device”，共同开发了一个基于CRISPR技术的诊断平台，用于快速、灵敏地检测猴痘病毒。

研究涉及多个步骤，包括病毒裂解、单步重组酶聚合酶扩增-CRISPR反应和结果解读，并采用一个便携式分析设备来执行整个过程。这项研究在全球公共卫生领域具有重要意义，特别是对于资源有限的环境中的现场快速诊断。

开发一种基于CRISPR的单步检测平台SCOPE（Streamlined CRISPR On Pod Evaluation），以便在资源有限的现场环境中实现对猴痘病毒的超灵敏检测。该平台通过简化病毒裂解步骤，在2分钟内从皮疹液、口腔拭子、唾液和尿液样本中快速释放病毒核酸，随后进行10分钟的单步重组酶聚合酶扩增(RPA)-CRISPR/Cas13a反应，实现快速检测。

平台设计与工作流程

SCOPE平台采用了一种简化的病毒裂解协议，仅需2分钟即可从皮疹液、口腔拭子、唾液和尿液样本中释放病毒核酸。随后，通过10分钟的单步RPA-CRISPR/Cas13a反应检测猴痘病毒。

该反应将重组酶聚合酶扩增（RPA）、T7转录和CRISPR/Cas13a反应整合在一个管中进行，通过CRISPR/Cas13a的转切割特性实现目标核酸的高效检测。整个过程可以在便携式设备CPod上完成，该设备集成了反应执行、信号采集和结果解释功能。

 便携式设备CPod设计紧凑，成本低，不需要复杂的设备，非常适合资源有限的现场环境。CPod通过蓝色LED和光谱传感器采集荧光信号，能够实现实时的检测和结果解读。

在102个临床样本中的验证结果显示，SCOPE平台的检测结果与实时PCR完全一致，灵敏度和特异性均达到100%。该平台可检测到低至0.5拷贝/µL的猴痘病毒，灵敏度与PCR检测相当。为了验证平台的灵敏度和重复性，研究团队在不同浓度的猴痘病毒DNA上重复进行了20次独立实验，结果表明检测的最低限度为0.5拷贝/µL，且没有交叉反应。

研究团队使用35例猴痘阳性样本、19例单纯疱疹病毒样本和48例健康男性的阴性样本进行了验证，结果显示SCOPE平台在检测猴痘病毒方面表现出100%的灵敏度和特异性，与qPCR检测完全一致。

检测步骤包括样本裂解、单步CRISPR反应和结果读取，整个过程在15分钟内完成，显著减少了操作步骤和时间。

END

文案 | 谢晓婷

排版 | 谢晓婷

审核 | 谢晓婷

发布｜姜笑南